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Análise Quantitativa Benzodiazepinas no Sangue Total por QuEChERS e LC-MS/MS

A benzodiazepinas (Benzos) é uma droga psicoativa amplamente prescrita para tratamento de ansiedade, insônia, nervosismo, convulsões, espasmos musculares e abstinência alcóolica. Benzos é considerados seguro e eficaz para o uso em curto prazo. Contudo, o uso frequente da droga pode levar a dependência. Devido a este atributo clinico, laboratórios forenses e toxicológicos estão interessados em monitorar esses compostos em amostras biológicas. O método de preparação comum de amostras biológicas inclue a precipitação de proteína seguido de “liquid-liquid extraction” (LLE) ou extração da parte solida (extração em fase solida) (SPE). Essa aplicação entrega um método fácil, rápido e efetivo através do QuEChERS para análises quantitativas de benzodiazepinas no sangue total.

1mL de sangue total é extraído usando 2mL de acetonitrilo (MeCN) com 0.4% de ácido fórmico (FA). 400mg de sulfato de magnésio (MgSO4) e 100mg de acetato de magnésio (NaOAc) (tubos de centrifugação de 15mL pré-embalado) são encarregados de realçar a fase de separação e a partição da benzodiazepina na parte orgânica. Após agitar e centrifugar, 1mL de resíduo sobressalente é purificado por um tubo de 2mL dSPE contendo 150mg de MgSO4, 50mg PSA e 50mg de C18. O MgSO4 absorve o resíduo da agua extraída, enquanto o PSA e o C18 removem os ácidos orgânicos e os Co-extrativos de matriz gordurosa, resultando em uma extração limpa para a análise de LC-MS/MS. Foram construídas curvas de calibração para a quantificação de benzodiazepinas

Os resultados de 10 compostos representativos foram lineares com R2 variando de 0,9963 a 1,0000 na faixa de concentração de 10 – 500 ng / mL. Os efeitos da matriz foram avaliados comparando a diferença de inclinação nas curvas de calibração da matriz e do padrão do solvente. Verificou-se que os efeitos da matriz eram menores, variando de -22 a 18%. Isso indica que o método QuEChERS com a limpeza de dSPE removeu suficientemente as interferências da matriz, que poderiam causar supressão ou aumento significativo de íons. Foram obtidas excelentes recuperações (85.5 – 105%) e desvios padrões relativos (RSD% ≤ 10.7%). Esse método também foi aplicado a 8 amostras reais de sangue total, a benzodiazepina não foi detectada acima da quantidade limite de 10 ng/mL.

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