Lise de células bacterianas no Geno / Moedor

O Geno / Grinder foi testado para determinar se essa tecnologia poderia ser usada para lisar células bacterianas. Placas de título de 96 poços padrão foram usadas com grânulos de moagem de sílica de 400-600 μl (Molecular Biology Grade, cat. No. 2166).
A distribuição dos grânulos em cada célula da placa de titulação pode ser realizada de várias maneiras. Neste caso, as pontas da micropipeta foram preenchidas até a marca com grânulos de moagem e cada ponta esvaziada em um poço da placa de titulação. Esta técnica fornecerá aproximadamente 0,4 gramas de esferas de sílica por poço. Outros sistemas de entrega estão disponíveis comercialmente.

Os experimentos foram realizados com 250 – 500 ml de bactérias: em um caso, o Gram-negativo Halomonas elongata tolerante ao sal, e no outro, o Bacillus Gram-positivo. Ambos os organismos foram cultivados até o estado de log tardio a 37oC. com agitação, em seguida, colhido por centrifugação a 7000 RPM por 10 minutos. 0,4 gramas de contas de sílica foram adicionadas a cada poço e a placa foi selada. As placas de titulação cheias foram então agitadas no Geno / Grinder a uma configuração de 1450 golpes por minuto, em intervalos de um minuto por períodos que variam de um minuto a doze minutos. O filtrado de cultura das placas agitadas foi então medido quanto à densidade óptica a 260 nm. Os dados médios para três “conjuntos de poços” separados são mostrados na Figura 1.

Aumento da densidade óptica em 260 nM

O Geno / Grinder é capaz de lisar células bacterianas em placas de titulação de 96 poços com 400-600 μl de esferas de sílica como meio de moagem. Com o aumento do tempo de moagem, o filtrado de cultura mostra um aumento definitivo na densidade óptica, indicando a liberação de ácidos nucléicos durante a moagem. Tempos de moagem de 6 a 9 minutos parecem ser adequados para a produção de quantidades mensuráveis ​​de ácido nucleico.